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¿Qué es la tinción de Gram?

Se conoce como coloración o Tinción de Gram a un tipo de tinción diferencial ampliamente usada en el campo de la bacteriología que proporciona ayuda preliminar al momento de clasificar en una muestra que tipo de bacterias está causando una infección. Gracias a esta técnica podemos clasificar como bacterias grampositivas a las que se observan de color morado o gramnegativas a las que se tiñen de rosado. Fue desarrollada en el año 1884 por un científico de origen danés llamado Christian Gram. El fin de esta técnica es poder proporcionar rápidamente ayuda en la clasificación y diferenciación morfológica de bacterias. 

¿Para qué se utiliza la tinción de Gram?

Esta técnica nos ayuda a realizar exámenes directos de muestras clínicas con el fin de determinar la presencia de bacterias u otros gérmenes que estén produciendo procesos infecciosos.

Por si fuera poco, es de gran ayuda al momento de corroborar los resultados de cultivos de muestras biológicas.

¿Cómo se realiza la tinción de Gram?

1.- Primeramente, debemos obtener una muestra que puede ser de un cultivo o de alguna muestra biológica (esputo, orina, pus, líquidos estériles).

La muestra debe ser extendida sobre una lámina portaobjeto

Esta muestra debe ser extendida sobre una lámina portaobjetos y realizar un frotis, se deja secar y se produce a fijar la muestra con alcohol metanol o con calor.

2.- Después de fijar la muestra se procederá a colocar sobre el frotis el colorante cristal violeta (violeta de genciana).

Es necesario dejar actuar por un tiempo aproximado de un minuto escurriendo el exceso.

3.- Posteriormente se debe agregar el lugol que va a actuar como mordiente y se deja actuar por un minuto.

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4.-Se procede a decolorar con alcohol-cetona por espacio de 30 segundos y luego se enjuaga con agua.

5.- Por último se aplica sobre la preparación el colorante de contraste que puede ser safranina o fucsina y se deja actuar por espacio de un minuto para luego lavar con agua y esperar que se seque la preparación y poder ver al microscopio.

Las bacterias se clasifican gracias a esta técnica 

Bacterias Grampositivas: Estas bacterias contienen una pared celular mucho más gruesa que está compuesta por una sustancia que se denomina peptidoglicano, en la que el colorante cristal violeta penetra produciendo una coloración morada que no se pierde al decolorar con alcohol-cetona.

La pared celular de las bacterias grampositivas es más gruesa

Bacterias Gramnegativas: estas bacterias poseen una pared celular mucho más delgada que pierde el colorante cristal violeta al lavar con el alcohol. En este caso, su coloración final es en tono rosado por efecto del colorante de contraste (safranina).

Algunos factores pueden hacer que la tinción de Gram no genere resultados fidedignos entre estos podemos mencionar:

  • Las condiciones de los cultivos, ya que si los cultivos o las muestras han sido expuestas a factores de temperatura, humedad, pH diferentes a las idóneas para su crecimiento puede alterar su pared celular y dificultar la adherencia de los colorantes.
  • El tiempo que posean los cultivos, ya que la edad de las células puede hacer que la forma de las bacterias tenga alguna modificación y pueda ser causal de confusión de parte del analizador.
  • Un problema muy común es la precipitación de colorantes y la excesiva decoloración con el alcohol.

Es importante mencionar que esta técnica es muy efectiva y ayuda a identificar el posible patógeno que está produciendo una enfermedad.

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También debe tomarse en cuenta que tiene una limitante como es la existencia de bacterias que no poseen pared celular (por ejemplo, Chlamidias) y que esta coloración no funciona para ellas.